擎科推出高品质Bst DNA聚合酶，助力高品质体外诊断试剂研发生产

聚合酶链式反应（PCR）是使用最广泛的核酸扩增技术，其灵敏度好，特异性高，被广泛应用于基因工程等领域。PCR技术需要进行变性、退火、延伸热循环过程，依赖于专业的热循环仪器（PCR仪器），通过琼脂糖凝胶电泳观察扩增结果。受限于仪器昂贵，体积大，不便于移动且PCR反应耗时较长，PCR技术在临床检测的应用中稍显不足。

等温扩增技术

等温扩增技术(Isothermal Amplification Technology，IAT)是近年来迅速发展的一类核酸体外扩增技术，主要包括环介导等温扩增（LAMP），重组酶聚合酶扩增（RPA），滚环扩增（RCA）等。与PCR技术不同，等温扩增只需要利用水浴锅等常用设备控温在单一恒定的温度下（一般是60~65℃恒温进行），就能快速完成核酸扩增反应，通过比色/目视比浊法直接观察扩增结果。

因等温扩增技术高效、特异，且降低了对设备的要求，缩短检测时间可实现即时检测，已被应用于体外诊断领域，如新型冠状病毒核酸检测试剂盒，沙门氏菌核酸检测试剂盒，非洲猪瘟核酸检测试剂盒等，今后也可能在传染病诊断、动物疫病分子诊断、环境微生物检测等领域大规模使用。

未来，等温扩增的赛道竞争可能会更激烈，而高品质的原料酶可以让等温扩增更灵敏，更高效。Bst DNA聚合酶是等温扩增中的核心酶，具有较强的热稳定性、链置换活性和聚合酶活性，在恒温条件下快速、高效、特异性的扩增模板。

擎科Bst 2.0 DNA聚合酶

擎科Bst 2.0 DNA聚合酶（链置换DNA聚合酶）来源于Bacillus strearothermophilus，经过擎科改造的Bst 2.0 DNA聚合酶大片段去除了Bst聚合酶全酶的5’→3’聚合酶活性，是采用大肠杆系统表达并纯化得到的重组蛋白，具有良好的链置换活性和聚合酶活性。Bst 2.0 DNA聚合酶可广泛应用于基于等温扩增技术的病原体即时检测，适用于LAMP扩增检测。

扩增性能良好

擎科Bst 2.0 DNA聚合酶具有较强的链置换活性，可进行高效扩增。

1.分别以1 pg~100 pg的λDNA模板，使用擎科和市售口碑优秀的N公司的Bst DNA聚合酶进行LAMP等温扩增，使用HNB变色法检测扩增产物。结果显示擎科Bst 2.0 DNA聚合酶扩增性能媲美市售口碑优秀的Bst DNA聚合酶。

图1.HNB变色法检测LAMP等温扩增产物（“NTC”：100 pg的λDNA模板中未加Bst 2.0 DNA聚合酶的反应体系，反应后体系依然为紫罗兰色，其他扩增成功的体系从紫罗兰色变为天蓝色）

2.分别以1 pg ~ 100 pg的λDNA模板，使用擎科Bst 2.0 DNA聚合酶进行LAMP等温扩增后，使用OG橙绿变色法检测产物。结果显示擎科Bst 2.0 DNA聚合酶对1 pg~100 pg的λDNA模板的检测均具有良好的扩增重复性。

图2.OG橙绿变色法检测LAMP等温扩增产物（“NTC”：100 pg的λDNA模板中未加Bst 2.0 DNA聚合酶的反应体系，反应后体系依然为橙色，其他扩增成功的体系从橙色变为绿色）图3.琼脂糖凝胶电泳检测LAMP等温扩增产物（“M”：DL2000 DNA Ladder）

完备的质控体系

擎科Bst 2.0 DNA聚合酶的生产质控严格遵循ISO13485标准质控体系，以保证等温扩增分子检测的准确性。

1.严格控制大肠杆菌核酸残留利用qPCR检测Bst 2.0 DNA聚合酶的核酸残留，结果显示Bst 2.0 DNA聚合酶存在低浓度的核酸残留，残留量在≤0.01 copies/U以内，符合生产标准。

图4.大肠杆菌残留检测结果

2.无核酸外切酶残留Bst 2.0 DNA聚合酶与质粒pUC19共同孵育后进行电泳检测（37℃水浴1 h后用80℃ 20 min进行失活），泳道中多了一条大于的产物，是因为Bst 2.0 DNA聚合酶与DNA结合后发生凝胶阻滞，通过转化试验进一步验证核酸外切酶残留情况。Bst 2.0 DNA聚合酶与质粒pUC19共同孵育后，转化至大肠杆菌DH5α，未见白斑（蓝斑/白斑＜1/9），判定无核酸外切酶残留。

图5.核酸外切酶活性残留检测结果（“M”：DL5000 DNA Ladder）（a）酶切产物琼脂糖凝胶电泳图（b）蓝白斑计数

3.无核酸内切酶残留

Bst 2.0 DNA聚合酶与质粒pUC19共同孵育(37℃水浴 1 h 后用80℃ 20 min进行失活)后电泳检测，结果显示经过Bst 2.0 DNA聚合酶共同孵育后电泳条带与未经处理的质粒pUC19条带一致，即Bst 2.0 DNA聚合酶无核酸内切酶残留。

图6.核酸内切酶检测结果（“M”：DL2000 DNA Ladder）

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